城市自來水一般經過沉淀、過濾及消毒等處理,含有的微生物較少,但當處理工藝不合理或者處理過程中造成污染等都會導致生活用水的二次污染,因此,加強生活飲用水的日常檢測十分必要。微生物檢測是生活污水監測中的重要內容。
根據《生活飲用水衛生標準》(GB5749-2006)中的水質常規指標,微生物指標中一般檢測總大腸菌群和細菌總數兩項指標,當檢出總大腸菌群時,需進一步檢測耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌。
總大腸菌群的檢測步驟:
生活飲用水:以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1ml充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中,總大腸菌群指一群在37℃溫度下培養24h能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
總大腸菌群代表了一大群有共同性質的革蘭氏陰性、桿狀細菌。這個菌群包括耐熱大腸桿菌和以糞便為來源的細菌,也包括一些來自環境本身的細菌。
因此總大腸菌群的存在可能不指示糞便污染。在極端的情況下,有高數量的總大腸菌群可能同時有低數量甚至零的耐熱大腸桿菌。這樣的結果并不一定代表糞便污染的存在。有可能是因為進入水體的土壤或者有機物或者在一定的條件下適合其他種類的大腸細菌的生長。總的來說,總大腸菌群在 35°C 或者 37°C 的溫度下,含有乳酸的培養基里面或者上面生長。
總大腸菌群濾膜法是指用孔徑為0.45um的微孔濾膜過濾水樣,將濾膜貼在添加乳糖的選擇隆培養基上在37℃條件下培養24h,能形成特征性菌落的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌以檢測水中總大腸菌群的方法。
1、培養基與試劑
總大腸菌群無色培養基是我公司改良的培養基,用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大腸菌群的快速檢測。
2、培養基的制備
取一管總大腸菌群培養基,溶于另50ml無菌蒸餾水,加熱溶解,煮沸1min,在實驗室條件下可121℃高壓滅菌15分鐘。使用時加3mL~5mL于滅菌吸收墊上,以剛浸沒吸收墊為準,再將濾膜置于培養墊上培養。
3、水樣過濾
撕開滅菌濾膜的包裝袋,用無菌鑷子(火焰滅菌器滅菌)夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾頭(火焰滅菌器滅菌)上,固定好過濾杯,將100mL水樣(如水樣含菌數較多,可減少過濾水樣量,或將水樣稀釋)注入過濾杯中,接上12V電池,抽濾。
4、培養
水樣過濾完后,再抽氣約5s,取下過濾杯,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分。移放在總大腸菌群培養基上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應與培養基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿蓋好,放入37℃ 恒溫箱內培養24h士2h。
5、結果觀察與報告
將培養后的平板取出觀察,大腸菌群菌落在無色培養基上為白色,如上圖。
計數培養基上大腸菌群菌落數,水中大腸菌群數以100ml水樣中大腸菌群菌落形成單位(CFU)表示,公式如下:
總大腸菌群菌落數(CFU/100ml)=數出的總大腸菌群數*100/過濾的水樣體積(ml)
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